加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

Native-PAGE胶制备试剂盒图片
产品货号:
RFT219
中文名称:
Native-PAGE胶制备试剂盒
英文名称:
Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒可用于配制非变性PAGE凝胶,可配制30-50块常规大小的非变性PAGE胶。


由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统,分离胶pH为8.8,因此要求待分离的蛋白等电点pI≤7.0,这样蛋白在凝胶系统内带负电荷,在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI>7.0,请选择碱性电泳凝胶系统分离(货号RFT220)。


组分规格保存条件
30% PAA(29:1)100mL4℃
4×分离胶缓冲液,pH8.8100mL
4×浓缩胶缓冲液,pH6.850mL
TEMED0.5mL4℃,避光
5×非变性非还原蛋白上样缓冲液1mL-20℃
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(干粉)1LRT
APS(干粉)0.5g

保存:按标签指示条件保存,有效期1年。


一、准备工作
APS溶液配制:
将0.5g APS干粉溶于5mL灭菌水中,彻底溶解后分装,1mL/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

二、制胶
  • 制备分离胶
    • 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
    • 按照表一将不同体积的分离胶成分在小烧杯中混匀;最后加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀。
      表一:配制不同浓度凝胶所需各组分的体积
      成分浓缩胶分离胶
      5%6%8%10%12%15%
      超纯水(mL)1.152.72.42.01.71.2
      30% PAA(29:1)(mL)0.3311.31.722.5
      4×浓缩胶缓冲液(mL)0.5-----
      4×分离胶缓冲液(mL)-1.251.251.251.251.25
      10% APS(μL)205050505050
      TEMED(μL)255555
      总体积(mL)255555

    • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于8×10cm凝胶,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1cm的水层,使凝胶表面保持平整。
    • 静置10~20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。
      注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
  • 制备浓缩胶
    • 去除覆盖在分离胶上的水层。
    • 按照表一将不同成分在一个小烧杯或试管中混合;最后加入10% APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀。
    • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
    • 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
    • 静置30~60分钟,等待浓缩胶聚合。
      注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。


三、电泳
  • 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(不含SDS)的配制
    将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中,加入约900mL水彻底溶解,用水定容至1L,即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
  • 样品处理:融化-混合-上样
    • 将5×非变性非还原蛋白上样缓冲液常温融化后混匀。
    • 将上样缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
    • 快甩离心收集到管底,上样电泳。(不要加热处理样品)
  • 电泳
    在电泳槽的内槽加入1×电泳缓冲液,轻轻拨出梳子,冲洗加样孔,随后在电泳槽外槽加入适量的1×电泳缓冲液。上样,恒电压150V电泳。
    恒电压150V
    起始电流30~40mA
    终止电流10~20mA
    电泳时间40~50min
  • 染色或进行下游实验

相关搜索:Native-PAGE胶制备试剂盒Native-PAGE胶制备Native-PAGE电泳Native-PAGE电泳非变性PAGE胶制备非变性PAGE电泳PAGE凝胶制备
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3